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渔人堡是古时匈牙利渔民为协助统领者击退土耳其人而修建的碉堡,现成为著名历史景点,也是匈牙利一处精美的艺术建筑。中航工业洪都副总经理张志林材料图:我国水兵“辽宁”号航空母舰原标题:中航等单位盛赞:没想到现在还有这么的将军!血性是会夭亡的,所以需求维护,需求培养。马彦平说,这条旅游路不仅要有“看得见的美景”,还要有“玩得爽的项目”,不仅让游客到此一游,还要让他们呆得住、游得久。一是创造精品,力保类型任务局面首胜。
protein purification resin

CloneEZ PCR克隆试剂盒

sbf888胜博发 CloneEZ PCR克隆试剂盒成功解决了PCR产物酶切带来的各种难题,实现了PCR产物不经过酶切直接克隆入载体!

产品特性

  • 适用于各种自备载体、插入片断、或者酶切位点,30 min即可将产物"同源置换"到目标载体上
  • 重组效率高
  • 高通量操作,批量克隆(可以用8连管,24、48、96孔板做高通量克隆)
  • 产品信息
  • 产品FAQ
  • 产品实例

订购信息


产品编号
名称
规格   
价格
选择
L00339
24 rxns
¥1750
就到了施工现场
本来之字型排列的灯光变得零散本来之字型排列的灯光变得零散

CloneEZ PCR克隆试剂盒工作原理

CloneEZ PCR克隆试剂盒操作非常方便,适用于各种PCR酶(常规Taq、各种高保真酶均可)的扩增产物. 根据酶切后线性化载体的两端序列,分别在PCR的两条引物的5'端加上15 base与载体末端同源的序列,PCR扩增的产物两端就会分别带有15 bp与线性化载体两端相同的序列
图1: PCR产物和线性化载体* 与CloneEZ专利酶充分混匀,22 ℃温浴30 min后按传统方法转化E. coli感受态细胞,就可以高效、定向地将PCR产物克隆到目标载体上,表达产物**也没有多余的氨基酸。

*载体只需线性化,不需去磷酸化载体,不用连接
**PCR产物不需酶切,不需末端补平

CloneEZ PCR克隆试剂盒 VS 传统克隆


  CloneEZ PCR无缝克隆技术
传统克隆
是否定向克隆
X
是否需要限制性内切酶
X
是否需要连接酶
X
所需试剂
  • CloneEZ酶(50 ul, 5 U/ul)
  • 10X反应缓冲液(100 ul)
  • pUC57线性载体(Kpnl/HindIII, 10 ul, 30 ng/ul)
  • 1 kb 插入片段( 10 ul, 100 ng/ul)
  • 连接酶
  • 10X反应缓冲液
长片段的高效克隆 4 kb 2 kb 1 kb
NA
93% 95% 100%
反应时间
PCR Cloning Kit

CloneEZ PCR克隆试剂盒单酶切结果=双酶切克隆!

图2: 在有些PCR产物克隆中,载体需要双酶切,其中一个酶切位点非常罕有,内切酶很昂贵或很难购买到,或者实验室中恰好双酶切中其中一个酶恰好用完而且购买需要很长时间,而这些又都是实验所必需的,从而使后续的克隆工作难以快速顺利完成。如果在载体上两个酶切位点相距<100 bp,使用sbf888胜博发 CloneEZ可以只单酶切克隆即可,完全可以得到双酶切克隆的结果,两个酶切位点间的多余序列会彻底去无踪,克隆效率只会稍微地降低而已!

CloneEZ PCR克隆试剂盒的转化率和重组率

图3: sbf888胜博发 CloneEZ PCR克隆试剂盒所克隆的片段可以来自PCR扩增产物,也可以来自酶切产物,但载体和片段末端的15 bp同源序列是必需的。对于<4 kb DNA片段,CloneEZ PCR克隆通常具有95%以上的重组效率。

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